Kraujo grupei nustatyti naudojamas metodas. Kraujo grupės nustatymas tsoliklonais. Priklausomai nuo eritrocitų savybių

Klasikinės kraujo grupės AB0

Priklausomai nuo agliutinogenų A ir B buvimo eritrocituose ir atitinkamų agliutininų α ir β serume, visi žmonės skirstomi į keturias grupes:

0 grupė (I): eritrocituose nėra agliutinogenų, serume nėra α ir β agliutininų;

A (II) grupė: eritrocituose - agliutinogenas A, serume - agliutininas β;

B (III) grupė: eritrocituose yra agliutinogeno B, serume aptinkamas agliutininas α;

AB (IV) grupė: eritrocituose – agliutinogenai A ir B, serume agliutininų nėra.

Pastaruoju metu AB0 sistemoje aptinkamos klasikinių antigenų A ir B bei kitų antigenų atmainos.

Antigeno A potipiai

Antigenas A negali būti laikomas vienalyčiu, yra du pagrindiniai potipiai: A 1 ir A 2. Eritrocitai su A 1 agliutinogeno potipiu aptinkami daug dažniau nei A 2 potipis (atitinkamai 88% ir 12%). Todėl, esant agliutinogenui A1, jis tiesiog žymimas kaip A, o žymėjimas su indeksu naudojamas tik palyginti retai.

6-1 lentelė. Kraujo grupės pagal AB0 sistemą

agliutinogenas A2. Pagal tai A (II) grupė turi du pogrupius: A (II) ir A 2 (II), o grupė AB (IV) - AB (IV) ir A 2 B (IV) (6-1 lentelė). Agliutinogenai A 1 ir A 2 skiriasi vienas nuo kito savybėmis.

A1 potipis pasižymi didesne adsorbcijos galia lyginant su A2 agliutinogenu, jis stipriau adsorbuoja agliutininą a iš serumo, todėl vadinamas stipriuoju, o A2 potipis silpnas.

Eritrocitai su A 2 agliutinogenu turi mažesnį agliutiniškumą.

Pogrupiai su A 1 ir A 2 agliutinogenais pasižymi skirtingomis serumo savybėmis. A 2 (II) ir A 2 B (IV) pogrupių serume gana dažnai yra agliutinino, Landsteinerio ir Levino vadinamo ekstraagliutininu a 1, kuris agliutinuojasi tik su eritrocitais A 1 ir neagliutinuoja su eritrocitais A 2. Tuo pačiu metu A (II) ir AB (IV) pogrupių serume jis yra gana retas, tačiau yra ekstraagliutinino a 2, kuris neagliutinuoja eritrocitus A 1, bet suteikia agliutinaciją su eritrocitais A 2.

Egzistuoja eritrocitų variantai su dar silpnesnėmis agliutinuojamomis savybėmis, kurios yra susijusios su A 3, A 4, A z potipių buvimu ir tt Nepaisant to, kad su šiais silpnais antigenais susiduriama gana retai, jie turi tam tikrą klinikinę reikšmę.

Antigeno B potipiai

B grupės antigenas yra homogeniškesnis. Aprašyti reti jo variantai (B 2, B 3, B w ir kt.) reikšmingos klinikinės reikšmės neturi.

Antigenas 0 ir medžiaga H

Vėliau pirmojoje 0 (I) kraujo grupėje buvo rasta specifinė medžiaga, taip pat pažymėta simboliu „0“. 0 faktorius – agliutinogenas, būdingas 0 (I), A 2 (II), A 2 B (IV) grupių eritrocitams.

Visų grupių eritrocitams būdingas H medžiagos buvimas, ji laikoma įprasta pirmtake medžiaga. Medžiaga H dažniau randama asmenims, turintiems pirmą kraujo grupę, o kituose jos yra nereikšmingais kiekiais. Kai kuriuose Indijos miesto Bombėjaus gyventojuose buvo rasta grupė, kurioje nėra agliutinogenų 0, A, B, H, tačiau yra antikūnų α, β, anti-0 ir anti-H. Vėliau ši reta kraujo rūšis, randama kitų šalių gyventojams, buvo vadinama „Bombėjaus tipu“.

"Kraujo chimeros"

Šiuo metu žinomos vadinamosios kraujo chimeros, nes žmogaus organizme vienu metu yra eritrocitų, priklausančių dviems AB0 fenotipams. Natūraliomis sąlygomis kraujo chimeros reiškinys randamas dvyniams. Jis taip pat gali pasireikšti per alogenines kaulų čiulpų transplantacijas arba masinius kraujo perpylimus. Nustatant kraujo grupę ir Rh priklausomybę esant kraujo chimerai, paprastai gaunamas iškreiptas rezultatas.

Kraujo grupės nustatymo metodai

Kraujo grupė pagal AB0 sistemą nustatoma naudojant agliutinacijos reakciją. Šiuo metu kraujo grupėms nustatyti pagal AB0 sistemą naudojami trys metodai:

Standartinių izohemagliutinuojančių serumų pagalba;

Standartinių izohemagliutinuojančių serumų ir standartinių eritrocitų pagalba (kryžminis metodas);

Naudojant monokloninius antikūnus (anti-A ir anti-B tsoliclones).

Yra tokia bendra taktika nustatant kraujo grupę.

Įprasto tyrimo metu ligoninės gydytojas nustato kraujo grupę naudodamas standartinius izohemagliutinuojančius serumus arba tsoliclonus, o po to siunčia kraują į serologinę laboratoriją, kad grupė patikrintų kryžminiu metodu.

Kraujo grupė laikoma apibrėžta tik tada, kai laboratorija patvirtina ligoninės gydytojo gautus duomenis. Jei tyrimų rezultatai skiriasi, abu tyrimai turi būti kartojami.

Jei reikia skubiai nustatyti kraujo grupę (kraujuojant būtina skubiai perpilti kraują), ligoninės gydytojas pats nustato kraujo grupę (laboratorijoje atlieka pakartotinį patikrinimą, tačiau post factum). Tokiais atvejais taip pat naudojamos reakcijos su izohemagliutinuojančiais serumais (arba poliklonais), tačiau, jei įmanoma, patartina naudoti kryžminį metodą.

Kraujo grupių nustatymas naudojant standartinius izohemagliutinuojančius serumus.

Metodo esmė – naudojant standartinius izohemagliutinuojančius serumus, tiriamame kraujyje aptikti A ir B grupės antigenus. Tam naudojama agliutinacijos reakcija. Reakcija nustatoma gerai apšviestoje patalpoje 15-25C temperatūroje.

Reikalinga įranga:

1. Standartiniai 0 (I), A (II), B (III) ir AB (IV) grupių dviejų skirtingų serijų izohemagliutinuojantys serumai. Serumai kraujo grupėms nustatyti gaminami specialiose serologinėse laboratorijose iš paaukoto kraujo. Serumai laikomi 4-8 C temperatūroje (šaldytuve). Serumo galiojimo laikas nurodytas etiketėje. Serumo titras (taip pat nurodytas etiketėje) turi būti ne mažesnis kaip 1:32 (B (W) serumo – ne mažesnis kaip 1:16/32). Serumo titras suprantamas kaip didžiausias jo praskiedimas, kuriam esant gali įvykti agliutinacijos reakcija. Serumas turi būti skaidrus. Patogumo dėlei standartiniai įvairių grupių hemagliutinuojantys serumai yra tamsinami taip, kad jie turėtų tam tikrą spalvą: 0 (I) - bespalvis, A (II) - mėlynas, B (III) - raudonas, AB (IV) - ryškiai geltonas. Pažymėtina, kad šios spalvos yra prie visų kraujo produktų, turinčių grupinę priklausomybę, etiketėse (kraujas, eritrocitų masė, plazma ir kt.).

2. Baltos porceliano ar emalio lėkštės, ar bet kokios kitos; plokštės sudrėkintu paviršiumi, pažymėtos 0 (I), A (P), B (W), AB (IV).

3. Izotoninis natrio chlorido tirpalas.

4. Adatos, pipetės, stiklinės lazdelės (bandinių stikleliai).

Reakcijos metodas

1. Prieš pradedant reakciją, pasirašoma ant plokštelės (uždedama tiriamojo pavardė ir inicialai), po to standartiniai I, II ir III grupių izohemagliutinuojantys serumai 0,1 ml tūrio (lašas apie 1 cm). skersmens) yra ant jo dedami atitinkamais pavadinimais. Siekiant išvengti klaidų, naudojamos dvi serumų serijos iš kiekvienos grupės, nes viena iš serijų gali būti mažo aktyvumo ir neduoti aiškios agliutinacijos. Iš viso gaunami šeši lašai, sudarydami dvi eilutes po tris lašus tokia tvarka iš kairės į dešinę: 0 (I), A (P), B (W).

2. Tyrimui kraujas imamas iš piršto arba iš venos. Šeši lašai tiriamojo kraujo, maždaug smeigtuko galvutės dydžio (0,01 ml, mažas lašas) nuosekliai su sausa stikline lazdele užlašinami ant plokštelės šešiuose taškuose, kiekviename šalia standartinio serumo lašo (tiriamojo kraujo kiekis turi būti maždaug 10 kartų mažiau nei standartinio serumo kiekis, su kuriuo jis maišomas), tada jie atsargiai sumaišomi stiklinėmis lazdelėmis suapvalintais kraštais.

Galima ir paprastesnė technika: vienas didelis kraujo lašas užlašinamas ant lėkštelės, iš kurios paimamas stiklelio kampučiu ir perpilamas į kiekvieną serumo lašą, švelniai sumaišant su pastaruoju. Tuo pačiu metu kiekvieną kartą kraujas imamas nauju stiklinės kampu, įsitikinant, kad lašai nesusilieja.

3. Išmaišę lėkštę periodiškai pakratykite.

Agliutinacija prasideda per pirmąsias 10-30 sekundžių, tačiau stebėjimas turėtų būti atliekamas iki 5 minučių, nes vėliau gali atsirasti agliutinacija, pavyzdžiui, su A2 (II) grupės eritrocitais.

4. Į tuos lašus, kuriuose įvyko agliutinacija, įlašinkite vieną lašą izotoninio natrio chlorido tirpalo, po kurio įvertinamas reakcijos rezultatas.

Rezultatų interpretacija

Agliutinacijos testas gali būti teigiamas arba neigiamas. Su teigiama reakcija Paprastai per pirmąsias 10-30 sekundžių mišinyje atsiranda plika akimi matomi maži raudoni grūdeliai (agliutinatai), susidedantys iš sulipusių eritrocitų. Maži grūdeliai pamažu susilieja į didesnius grūdelius, o kartais ir į netaisyklingus dribsnius. Tokiu atveju serumo spalva iš dalies arba visiškai pakinta. Teigiama reakcija gali būti smėlio arba žiedlapių (6-1 pav.).

Ryžiai. 6-1. Agliutinacijos tipai: a – agliutinacijos nėra; b - smėlio agliutinacija; c - žiedlapių agliutinacija

Su neigiama reakcija lašas išlieka tolygiai raudonos spalvos, jame nerandama grūdelių (agliutinatų).

Reakcijų rezultatai lašeliuose su tos pačios grupės serumais (dvi serijos) turėtų sutapti.

Tirto kraujo priklausymas atitinkamai grupei nustatomas pagal agliutinacijos buvimą ar nebuvimą reaguojant su atitinkamu serumu po 5 minučių stebėjimo (6-2 lentelė).

Pažymėtina, kad jei visų trijų grupių serumai davė teigiamą reakciją, tai rodo, kad tiriamajame kraujyje yra ir agliutinogenų (A ir B), ir jis priklauso AB (IV) grupei. Tačiau tokiais atvejais, siekiant atmesti nespecifinę agliutinacijos reakciją, būtina atlikti papildomą kontrolinį tiriamo kraujo tyrimą su standartiniu AB (IV) grupės izohemagliutinuojančiu serumu, kuriame nėra agliunitininų. Tik tai, kad šiame laše nėra agliutinacijos, kai yra agliutinacijos lašuose, kurių sudėtyje yra standartinių 0 (I), A (II) ir B (III) grupių serumų, galima reakciją laikyti specifine ir nurodyti tiriamą kraują. į grupę AB0 (IV).

6-2 lentelė. Reakcijos su standartiniais izohemagliutinuojančiais serumais rezultatų įvertinimas.

Pažymėtina, kad esant silpnam A 2 antigenui tiriamajame kraujyje, vėliau (po 3-4 min.) prasideda agliutinacijos reakcija su 0 (I) ir B (III) grupių hemagliutinuojančiais serumais.

Antigeno A pogrupių identifikavimas atliekamas serologinėje laboratorijoje naudojant specialius sėklų ekstraktus Dolichos biflorus ir Ulex Europeus. Pirmasis iš jų agliutinuoja eritrocitus su A1 antigenu, bet nereaguoja su A2 antigenu, o antrasis – atvirkščiai.

Kraujo grupės yra normalios paveldimos įvairių imunologinių kraujo požymių. Remiantis šiomis savybėmis, visi žmonės yra suskirstyti į keturias grupes, nepriklausomai nuo rasės, amžiaus ir lyties. Žmogaus kraujo grupė visą gyvenimą išlieka pastovi. Vienos kraujo grupės žmonės skiriasi nuo kitų kraujo grupių žmonių agliutinogenų (A ir B) buvimu arba nebuvimu eritrocituose bei agliutininų α ir β buvimu serume.

AB0 sistemos kraujo grupės: 0 (I) kraujo grupėje yra agliutininų α ir β, agliutinogenų joje nėra; A (II) kraujo grupė – agliutininas α ir agliutinogenas A; B (III) kraujo grupė-agliutininas ir agliutinogenas B; AB (IV) kraujo grupė – yra agliutinogenų A ir B, agliutininų nėra.

Recipientas yra asmuo, kuriam perpilamas kraujas, donoras yra asmuo, kuris duoda savo kraują perpylimui. Tos pačios grupės kraujas idealiai tinka recipientui. Kraujas yra visiškai nesuderinamas, jei recipientas turi agliutininų su donoro eritrocitais, nes tokiais atvejais vieno kraujo agliutinogenas A derinamas su agliutininu, o kito arba agliutinogenas B su agliutininu β. Vystosi vadinamasis, t.y. eritrocitų sulipimas į mažus ir didelius gumuliukus. Nesuderinamo kraujo perpylimas sukelia rimtų pasekmių ir gali būti mirtinas. 0 (I) grupės recipientui negali būti perpiltas bet kurios kitos grupės kraujas, išskyrus tą pačią. AB (IV) grupės recipientas neturi agliutininų, todėl jam gali būti perpiltas visų grupių kraujas. AB grupės (IV) gavėjas yra universalus gavėjas. 0 (I) kraujo grupė gali būti perpilama bet kurios kraujo grupės žmonėms. Todėl žmonės, turintys 0 (I) grupę, vadinami universaliais donorais.

Be agliutinogenų A ir B, eritrocituose kartais randama ir kitų agliutinogenų (pavyzdžiui, ir kt.). Tais atvejais, kai kraujas nesuderinamas su Rh faktoriumi (žr.), taip pat neįmanoma atlikti perpylimo, kad būtų išvengta rimtų komplikacijų, susijusių su raudonųjų kraujo kūnelių sunaikinimu (hemolizė).

Prieš kiekvieną kraujo perpylimą, atliekamą pagal nurodymus ir prižiūrint gydytojui, būtina nustatyti kraujo grupę ir nustatyti jos suderinamumą.

Ryžiai. 1-4. Kraujo grupių nustatymas standartiniais serumais (A, B, 0).
Ryžiai. 1. Ištirti 0 (I) kraujo grupę.
Ryžiai. 2. Ištirkite A (II) kraujo grupę.
Ryžiai. 3. Ištirti B (III) grupės kraują.
Ryžiai. 4. Ištirti AB (IV) kraujo grupę.

Kraujo grupių nustatymo metodas... Kraujo grupei nustatyti paruoškite švarią lėkštę, pieštuką stiklui, standartinius 0 (I), A (II) ir B (III) kraujo grupių serumus, buteliukus su izotoniniu natrio chlorido tirpalu, alkoholiu ir jodu, sugeriančią medvilnę, stiklinė stiklinė arba stiklinės lazdelės ir trys pipetės, kurios turi būti sausos (vanduo ardo).

Plokštelė pieštuku padalinta į tris sektorius, kurie žymi 0 (I), A (I), B (III). Į atitinkamą sektorių įvairiomis pipetėmis užlašinamas vienas didelis lašas standartinio serumo 0 (I), A (II), B (III) kraujo grupės. Po to, kai iš pipetės išleidžiamas serumo lašas, jis nedelsiant įmerkiamas į buteliuką, iš kurio buvo paimtas. Prieš imdami kraują, nuvalykite pirštą alkoholiu. Sušvirkštus į piršto minkštimą, adata išspaudžiamas kraujo lašas. Stiklo lazdele arba švaraus stiklelio kampu įlašinkite tris kraujo lašus (kiekvienas smeigtuko galvutės dydžio) ant plokštelės šalia 0 (I), A (II) ir B (III) serumo kraujo grupių. Pažymėjus laiką laikrodyje, kiekvieną kartą naujais stikliniais strypais kraujas pakaitomis maišomas su 0 (I), A (II) ir B (III) kraujo grupių serumais, kol mišinys tampa tolygiai rausvas. Kraujo grupės nustatymas atliekamas per 5 minutes. (sekite laikrodį). Praėjus šiam laikui, į kiekvieną mišinio lašą įlašinamas vienas lašas izotoninio natrio chlorido tirpalo. Po to kraujo plokštelė šiek tiek pakratoma, pakreipiama į skirtingas puses, kad mišiniai gerai susimaišytų su izotoniniu natrio chlorido tirpalu, bet neišsisklaidytų ant stiklo. Esant teigiamai reakcijai, per pirmąsias minutes nuo maišymo pradžios net prieš įpilant izotoninio tirpalo, mišinyje atsiranda mažyčių raudonų grūdelių, susidedančių iš sulipusių eritrocitų. Smulkūs grūdeliai susilieja į didesnius, o kartais – į įvairaus dydžio dribsnius (agliutinacijos reiškinys). Jei reakcija yra neigiama, mišinys išlieka tolygiai rausvos spalvos. Atliekant tyrimą su trimis aukščiau išvardytais kiekvienos kraujo grupės serumais, gali pasireikšti tam tikras teigiamų ir neigiamų reakcijų derinys (1-4 pav.). Jei visi trys serumai davė neigiamą reakciją, t. y. visi mišiniai liko vienodos rožinės spalvos, tiriamasis kraujas priklauso 0 (I) grupei. Jei tik kraujo grupės A (I) serumas davė neigiamą reakciją, o 0 (I) ir B (III) kraujo grupių serumai davė teigiamą reakciją, tai yra, juose atsirado grūdelių, tai tirtas kraujas priklauso A ( II) grupė. Jei kraujo grupės B (III) serumas davė neigiamą reakciją, o 0 (I) ir A (II) kraujo grupės serumas - teigiamas, tai tirtas kraujas priklauso B (III) grupei. Jei visi trys serumai davė teigiamas reakcijas, tai yra, visur pasirodė granuliuotumas, tirtas kraujas priklauso AB (IV) grupei. Bet kokie kiti deriniai rodo apibrėžimo klaidą. Kraujo grupių nustatymo klaidų priežastys ir jų prevencijos priemonės. 1. Kraujo perteklius, jei išgertas per didelis lašas. Kraujo lašas turi būti 10 kartų mažesnis nei serumo lašas. 2. Jei serumas yra silpnas arba tiriamojo eritrocitai prastai sukimba, matosi agliutinacija (žr.), nes reakcija prasideda vėlai arba yra prastai išreikšta. Būtina paimti patikimus serumus, kurių aktyvumas patikrintas ir galiojimo laikas nepasibaigęs. 3. Esant žemai aplinkos temperatūrai, gali pasireikšti nespecifinė šalta agliutinacija – panagliutinacija. Įpylus izotoninio natrio chlorido tirpalo ir pakratant plokštelę, paprastai pašalinama šalta agliutinacija. Norėdami to išvengti, aplinkos temperatūra turi būti bent 12 ir ne aukštesnė kaip 25 °. 4. Ilgai stebint, mišinys pradeda džiūti iš periferijos, kur kartais atsiranda grūdėtumas. Nesant granuliuotumo skystoje mišinio dalyje, galime kalbėti apie neigiamą agliutinacijos reakciją.

Nustačius kraujo grupę, gydytojas turi nedelsdamas užsirašyti ant veido lapo. Baigus darbą, plokštelę, pipetes ir stiklelius reikia kruopščiai nuplauti po čiaupu šiltu vandeniu, sausai nušluostyti ir įdėti į spintelę. ampulėse arba buteliukuose yra laikomi sausoje ir šiltoje patalpoje, spintelėje, užrakintoje raktu ne aukštesnėje kaip 20 ° t ° temperatūroje.

Kraujo grupės nustatymas standartiniais eritrocitais (vadinamoji dviguba reakcija) taikomas tik laboratorijose ir stotyse. Kasdieniame darbe jie naudoja agliutinacijos reakciją su standartiniais serumais pagal aukščiau aprašytą metodą.

BENDROSIOS NUOSTATOS

ABO kraujo grupių sistema susideda iš dviejų grupių agliutinogenų – A ir B bei dviejų atitinkamų agliutininų plazmoje – alfa (anti-A) ir beta (anti-B). Įvairūs šių antigenų ir antikūnų deriniai sudaro keturias kraujo grupes: 0 grupė (1) – abiejų antigenų nėra; A grupė (II) – ant eritrocitų yra tik antigenas A; B grupė (III) – ant eritrocitų yra tik antigenas B; AB (IV) grupė – eritrocituose yra antigenų A ir B.

ABO sistemos išskirtinumas slypi tame, kad neimunizuotų žmonių plazmoje yra natūralių antikūnų prieš antigeną, kurio eritrocituose nėra: 0 (1) grupės asmenims - antikūnai prieš A ir B; A (II) grupės asmenims - anti-B antikūnai; B (III) grupės asmenims - anti-A antikūnai; AB (IV) grupės asmenų neturi antikūnų prieš ABO sistemos antigenus.

Tolesniame tekste anti-A ir anti-B antikūnai bus vadinami anti-A ir anti-B.

ABO kraujo grupės nustatymas atliekamas nustatant specifinius antigenus ir antikūnus (dviguba arba kryžminė reakcija). Anti-A ir anti-B nustatomi kraujo serume naudojant standartinius eritrocitus A (II) ir B (III). Antigenų A ir B buvimas ar nebuvimas eritrocituose nustatomas naudojant atitinkamo specifiškumo monokloninius arba polikloninius antikūnus (standartinius hemagliutinuojančius serumus).

Kraujo grupės nustatymas atliekamas du kartus: pirminiai tyrimai - medicinos skyriuje (kraujo ruošimo brigadoje); patvirtinamieji tyrimai – laboratoriniame skyriuje. Imunohematologinių laboratorinių tyrimų atlikimo kraujo perpylimo metu algoritmas parodytas Fig. 18.1.

Kraujo grupės nustatymo rezultatas įrašomas į ligos istorijos lapo viršutiniame dešiniajame kampe arba donorų registre (kortelėje) su data ir pasirašo nustatęs gydytojas.

Rusijos šiaurės vakaruose ABO sistemos kraujo grupių pasiskirstymas populiacijoje yra toks: 0 grupė (I) - 35%; A grupė (II) - 35-40%; B grupė (III) - 15-20%; grupė AB (IV) - 5-10 proc.

Reikia pažymėti, kad yra skirtingų tipų (silpnų variantų) tiek antigeno A (didesniu mastu), tiek antigeno B. Dažniausi antigeno A tipai - A 1 ir A 2. Antigeno A 1 paplitimas tarp A (II) ir AB (IV) grupių asmenų yra 80 proc., o antigeno A 2 – apie 20 proc. Kraujo mėginiuose su A 2 gali būti anti-A 1 antikūnų, kurie sąveikauja su standartiniais A (II) grupės eritrocitais. Anti-A1 buvimas nustatomas kryžminiu kraujo grupių nustatymu ir individualaus suderinamumo testu.

Skirtingam antigeno A variantų (A 1 ir A 2) nustatymui būtina naudoti specifinius reagentus (fitohemagliutininus arba anti-A 1 monokloninius antikūnus. A 2 (II) ir A 2 B (IV) grupių pacientams reikia turi būti perpiltas atitinkamai A 2 (II) ir A 2 B (IV) grupių eritrocitų turinčiais hemokomponentais. 0 (I) ir B (III) – pacientams, kurių kraujo grupė A 2 B (II).

18.4 lentelė. ABO kraujo grupės nustatymo rezultatai
Tyrimo rezultatai						Tirto kraujo priklausomybė grupei
eritrocitai su reagentu			serumas (plazma) su standartiniais eritrocitais
prieš AB	prieš A	prieš B	0 (aš)	A (II)	B (III)
-	-	-	-	+	+	0 (aš)
+	+	-	-	-	+	A (II)
+	-	+	-	+	-	B (III)
+	+	+	-	-	-	AB (IV)
Pavadinimai: + - agliutinacijos buvimas, - - agliutinacijos nebuvimas

Kraujo grupės nustatymas pagal ABO sistemą

Kraujo grupes nustato standartiniai serumai (paprasta reakcija) ir standartiniai eritrocitai (dviguba arba kryžminė reakcija).

Kraujo grupė pagal paprastą reakciją būtinai nustatoma pagal dvi standartinių izohemagliutinuojančių serumų serijas.

Ryžto progresas [Rodyti] .
Kraujo grupės nustatymas tabletėse atliekamas esant geram apšvietimui ir temperatūrai nuo + 15 iki + 25 ° C. Kairėje tabletės pusėje parašykite 0 (1), viduryje - A (II), dešinėje - B (III). Tabletės viršutinio krašto viduryje pažymima donoro pavardė arba tiriamo kraujo numeris. Naudokite aktyvius standartinius trijų grupių serumus (O, A, B), kurių titras ne mažesnis kaip 1:32, dvi serijos. Serumai dedami į specialias stelažus dviem eilėmis. Pažymėta pipetė atitinka kiekvieną serumą. Papildomai kontrolei naudojamas AB (IV) grupės serumas.
Ant plokštelės dviem eilėmis užlašinami vienas - du lašai standartinio serumo: 0 (1) grupės serumas - kairėje, A (II) grupės serumas - viduryje, B (III) grupės serumas - ant teisingai.
Prie kiekvieno serumo lašo pipete arba stikline lazdele užlašinami kraujo lašai iš piršto lazdelės ar mėgintuvėlio ir sumaišomi su lazdele. Kraujo kiekis turi būti 8-10 kartų mažesnis nei serumo. Sumaišius, lėkštė arba tabletė švelniai purtoma ranka, kad būtų lengviau ir tiksliau agliutinuoti raudonuosius kraujo kūnelius. Prasidėjus agliutinacijai, bet ne anksčiau kaip po 3 minučių, į serumo su eritrocitais lašus, kuriuose įvyko agliutinacija, įlašinamas vienas lašas 0,9% natrio chlorido tirpalo ir stebima tol, kol praeis 5 minutės. Po 5 minučių perskaitykite reakciją sklindančioje šviesoje.
Jei agliutinacija neryški, į serumo ir kraujo mišinį papildomai įlašinamas vienas lašas 0,9 % natrio chlorido tirpalo, po to daroma išvada dėl priklausomybės grupei (18.4 lentelė).
Reakcijos rezultatai [Rodyti] .
1. Agliutinacijos nebuvimas visuose trijuose lašuose rodo, kad tiriamame kraujyje agliutinogeno nėra, tai yra, kraujas priklauso 0 (I) grupei.
2. Agliutinacijos pradžia lašuose su serumu 0 (I) ir B (III) rodo, kad kraujyje yra agliutinogeno A, tai yra, kraujas priklauso A (II) grupei.
3. Agliutinacijos buvimas lašuose su 0 (I) ir A (II) grupių serumais rodo, kad tiriamajame kraujyje yra agliutinogeno B, ty B (III) grupės kraujo.
4. Agliutinacija visuose trijuose lašuose rodo agliutinogenų A ir B buvimą tiriamame kraujyje, tai yra, kraujas priklauso AB (IV) grupei. Tačiau šiuo atveju, atsižvelgiant į tai, kad dėl nespecifinės reakcijos galima agliutinacija su visais serumais, ant plokštelės ar plokštelės būtina užlašinti du ar tris lašus standartinio AB (IV) grupės serumo ir įlašinti 1 lašą testo. kraujas jiems. Serumas ir kraujas sumaišomi ir reakcijos rezultatas stebimas 5 minutes.
  Jei agliutinacija nevyksta, tada tiriamas kraujas priskiriamas AB (IV). Jei atsiranda agliutinacija su AB (IV) grupės serumu, reakcija yra nespecifinė. Esant silpnai agliutinacijai ir visais abejotinais atvejais kraujas dar kartą tikrinamas standartiniais kitų serijų serumais.

Kraujo grupės ABO dvigubos reakcijos nustatymas
(pagal standartinius serumus ir standartinius eritrocitus)

Standartiniai eritrocitai – tai 0 (I), A (II) ir B (III) grupių šviežių natūralių eritrocitų (arba tiriamųjų ląstelių, nuplautų nuo konservanto) 10-20 % suspensija 0,9 % natrio chlorido tirpale arba citrato-fiziologiniame tirpale. Natūralūs standartiniai eritrocitai gali būti naudojami per 2-3 dienas, jei jie laikomi izotoniniame druskos tirpale + 4 ° C temperatūroje. Konservuoti standartiniai eritrocitai 2 mėnesius laikomi + 4 ° C temperatūroje ir prieš naudojimą nuplaunami iš konservanto tirpalo.

Ampulės ar buteliukai su standartiniais serumais ir standartiniais eritrocitais dedami į specialias stelažus su atitinkamomis etiketėmis. Norint dirbti su tipavimo reagentais, naudojamos sausai švarios pipetės, atskiros kiekvienam reagentui. Stiklo (plastikinių) strypų ir pipečių plovimui stiklines paruoškite su 0,9% natrio chlorido tirpalu.

Norėdami nustatyti grupę, paimkite 3-5 ml kraujo į mėgintuvėlį be stabilizatoriaus. Kraujas turi nusistovėti 1,5–2 valandas + 15–25 ° C temperatūroje.

Ryžto progresas [Rodyti] .
Ant plokštelės užlašinami du lašai (0,1 ml) dviejų serijų 0 (I), A (II), B (III) grupių standartinių serumų. Atitinkamai, kiekvienoje serumų grupėje yra vienas nedidelis lašelis (0,01 ml) standartinių 0 (I), A (II), B (III) grupių eritrocitų. Vienas lašas tiriamojo kraujo įlašinamas į standartinius serumus, o du lašai tiriamojo serumo – į standartinius eritrocitus. Kraujo kiekis turi būti 8-10 kartų mažesnis nei serumo. Lašai sumaišomi su stikline lazdele ir, 5 minutes purtant tabletę rankose, stebima agliutinacijos pradžia. Jei agliutinacija neryški, į serumo ir kraujo mišinį papildomai įlašinamas vienas lašas 0,9 % natrio chlorido tirpalo (0,1 ml), po to daroma išvada apie priklausymą grupei (18.4 lentelė).
ABO sistemos kraujo grupės nustatymo rezultatų vertinimas [Rodyti] .
1. Agliutinacijos su standartiniais eritrocitais A ir B buvimas ir agliutinacijos nebuvimas trijuose standartiniuose dviejų serijų serumuose rodo, kad tiriamajame serume yra ir alfa, ir beta agliutininų, o tiriamuosiuose eritrocituose nėra agliutinogenų, tai yra, kraujas priklauso į 0 (I) grupę...
2. Agliutinacijos buvimas su standartiniais 0 (I), B (III) grupių serumais ir su standartiniais B (III) grupės eritrocitais rodo, kad tirtuose eritrocituose yra agliutinogeno A, o tiriamajame serume yra agliutinino beta. Todėl kraujas priklauso A (II) grupei.
3. Agliutinacija su standartiniais 0 (I), A (II) grupių serumais ir A (II) grupės standartiniais eritrocitais rodo, kad tiriamuosiuose eritrocituose yra agliutinogeno B, o tiriamajame serume yra agliutinino alfa. Vadinasi, kraujas priklauso B (III) grupei.
4. Agliutinacijos su visais standartiniais serumais buvimas ir agliutinacijos su visais standartiniais eritrocitais nebuvimas rodo, kad tiriamuose eritrocituose yra abu agliutininai, tai yra, kraujas priklauso AB (IV) grupei.

Priklausomybės kraujo grupei nustatymas
naudojant anti-A ir anti-B tsoliclones

Tsoliklones anti-A ir anti-B (monokloniniai antikūnai prieš A ir B antigenus) yra skirti žmogaus ABO sistemos kraujo grupei nustatyti vietoj standartinių izohemagliutinuojančių serumų. Kiekvienai kraujo grupei nustatyti naudokite vieną anti-A ir anti-B reagento partiją.

Ryžto progresas [Rodyti] .
Ant plokštelės (plokštelės) užlašinamas vienas didelis lašas anti-A ir anti-B tsoliclones (0,1 ml) su atitinkamais užrašais: „Anti-A“ arba „Anti-B“. Šalia padėkite vieną nedidelį tiriamojo kraujo lašą (kraujo reagentų santykis – 1:10), tada reagentas ir kraujas sumaišomi ir reakcijos eiga stebima švelniai purtant tabletę ar plokštelę.
Agliutinacija su anti-A ir anti-B tsoliclones dažniausiai įvyksta per pirmąsias 5-10 s. Stebėti reikia 2,5 minutės, nes vėliau gali prasidėti agliutinacija su eritrocitais, turinčiais silpnų A arba B antigenų tipų.
Agliutinacijos reakcijos su anti-A ir anti-B tsoliclonais rezultatų įvertinimas pateiktas lentelėje. 18.4, kuriame taip pat pateikiami agliutininų nustatymo donorų serume, naudojant standartinius eritrocitus, rezultatai.

Įtarus spontanišką agliutinaciją asmenims, turintiems AB (IV) kraujo grupę, atliekamas kontrolinis tyrimas su 0,9 % natrio chlorido tirpalu. Reakcija turėtų būti neigiama.

Anti-A (rožinis) ir anti-B (mėlynas) ciklonai tiekiami natūralios ir liofilizuotos formos ampulėse po 20, 50, 100 ir 200 dozių su tirpikliu, pridedamu prie kiekvienos ampulės, atitinkamai 2, 5, 10, 20 ml. .

Papildoma ABO kraujo grupės nustatymo su anti-A ir anti-B reagentais teisingumo kontrolė yra anti-AB monokloninis reagentas (Hematolog, Maskva). Patartina anti-AB reagentą naudoti lygiagrečiai tiek su imuniniais polikloniniais serumais, tiek su monokloniniais reagentais. Dėl reakcijos su anti-AB reagentu išsivysto A (II), B (III) ir AB (IV) grupių eritrocitų agliutinacija; 0 (I) grupės eritrocitai neturi agliutinacijos.

KLAIDOS NUSTATANT GRUPĖS PRIEDUS

Klaidos nustatant kraujo grupes gali priklausyti nuo trijų priežasčių:

techninis;
standartinių serumų ir standartinių eritrocitų nepakankamumas;
tiriamo kraujo biologinės savybės.

Klaidos dėl techninių priežasčių apima:

a) neteisingas serumų išdėstymas lėkštėje;
b) neteisingi kiekybiniai serumų ir eritrocitų santykiai;
c) nepakankamai švarių tablečių ir kitų daiktų, kurie liečiasi su krauju, naudojimas. Kiekvienam serumui turi būti atskira pipetė; pipetėms skalauti reikia naudoti tik 0,9 % natrio chlorido tirpalą;
d) neteisingas tiriamojo kraujo įrašymas;
e) agliutinacijos reakcijai nustatyto laiko nesilaikymas; paskubomis, kai į reakciją atsižvelgiama nepasibaigus 5 minutėms, agliutinacija gali neįvykti, jei tiriamajame kraujyje yra silpnų agliutinogenų; jei reakcija yra per daug veikiama ilgiau nei 5 minutes, lašai gali išdžiūti iš kraštų, imituodami agliutinaciją, dėl kurios taip pat bus padaryta klaidinga išvada;
f) agliutinacijos nebuvimas dėl aukštos (virš 25 °C) aplinkos temperatūros. Norint išvengti šios klaidos, patartina naudoti specialiai paruoštus serumus darbui karštame klimate; kraujo grupėms nustatyti lėkštėje arba plastikiniame padėkle, kurio dugno išorinis paviršius panardintas į šaltą vandenį.
g) netinkamas centrifugavimas: nepakankamas centrifugavimas gali sukelti klaidingai neigiamą rezultatą, o per didelis centrifugavimas gali sukelti klaidingą teigiamą rezultatą.

Klaidos dėl netinkamų standartinių serumų ir standartinių eritrocitų naudojimo:

a) silpni standartiniai serumai, kurių titras mažesnis nei 1:32 arba kurių galiojimo laikas pasibaigęs, gali sukelti vėlyvą ir silpną agliutinaciją;
b) naudojant netinkamus standartinius serumus ar eritrocitus, kurie buvo paruošti nesteriliai ir nepakankamai konservuoti, atsiranda nespecifinė „bakterinė“ agliutinacija.

Klaidos, priklausančios nuo analizuojamo kraujo biologinių savybių:

Klaidos, priklausančios nuo tirtų eritrocitų biologinių savybių:

a) vėlyva ir silpna agliutinacija paaiškinama „silpnomis“ antigenų formomis, eritrocitais, dažniau – silpno agliutinogeno A 2 buvimu A ir AB grupėse. Tuo pačiu metu nustatant kraujo grupę netiriant serume, ar nėra agliutininų (paprasta reakcija), gali atsirasti klaidų, dėl kurių A 2 B grupės kraujas apibrėžiamas kaip B (III) grupė. ), o kraujas A2 – kaip 0 grupė (I). Todėl, siekiant išvengti klaidų, tiek donorų, tiek recipientų kraujo grupės nustatymas turi būti atliekamas naudojant standartinius eritrocitus (dviguba arba kryžminė reakcija). Norint nustatyti agliutinogeną A2, rekomenduojama pakartoti tyrimą su kitų tipų (daugybe) reagentų, naudojant skirtingus laboratorinius stiklinius indus, ilginant reakcijos registravimo laiką.
Specifiniai reagentai kraujo grupei išaiškinti esant silpniems antigeno A variantams (A1, A2, A3) tiesioginės agliutinacijos reakcijos būdu yra anti-A sl tsoliclon ir anti-A reagentas).
b) „panagliutinacija“ arba „autoagliutinacija“, tai yra, kraujo gebėjimas suteikti tą pačią nespecifinę agliutinaciją su visais serumais ir net su savo serumu. Tokios reakcijos intensyvumas susilpnėja po 5 minučių, o tikroji agliutinacija didėja. Dažniausiai nustatoma hematologiniams, onkologiniams ligoniams, apdegusiems ligoniams ir kt.. Kontrolei rekomenduojama įvertinti, ar standartiniame AB (IV) grupės serume ir fiziologiniame tirpale nevyksta tirtų eritrocitų agliutinacija.
Kraujo grupę su „panagliutinacija“ galima nustatyti tris kartus nuplovus eritrocitus. Norint pašalinti nespecifinę agliutinaciją, plokštelė 5 minutėms dedama į termostatą + 37 ° C temperatūroje, po to nespecifinė agliutinacija išnyksta, tačiau išlieka tikroji. Patartina pakartoti nustatymą naudojant monokloninius antikūnus, nustatant Kumbso testą.
Tuo atveju, jei eritrocitų plovimas neduoda norimo rezultato, būtina pakartotinai paimti kraujo mėginį į pašildytą mėgintuvėlį, mėginį įdėti į terminį indą, kad temperatūra būtų + 37 ° C, ir pristatyti. į laboratoriją tyrimams. Kraujo grupės nustatymas turi būti atliekamas + 37 ° C temperatūroje, kuriai naudojami iš anksto pašildyti reagentai, fiziologinis tirpalas ir tabletė.
c) tirto kraujo eritrocitai sulankstomi į „monetų stulpelius“, kuriuos makroskopijos metu galima supainioti su agliutinatais. Įpylus 1–2 lašus izotoninio natrio chlorido tirpalo, po kurio švelniai pasukant lėkštę, „monetų juostos“ paprastai sunaikinamos.
d) mišri arba nepilna agliutinacija: dalis eritrocitų agliutinuojasi, o dalis lieka laisvi. Jis stebimas A (II), B (III) ir AB (IV) grupių pacientams po kaulų čiulpų transplantacijos arba per pirmuosius tris mėnesius po 0 (I) grupės kraujo perpylimo. Periferinių eritrocitų heterogeniškumas aiškiai patvirtintas DiaMed gelio testu.

Klaidos, priklausančios nuo tiriamo serumo biologinių savybių:

a) įprasto tyrimo metu aptikti skirtingo specifiškumo antikūnai yra ankstesnio jautrinimo rezultatas. Patartina nustatyti antikūnų specifiškumą ir atrinkti tipiškus eritrocitus be antigeno, nuo kurio buvo nustatyta imunizacija. Imunizuotas recipientas turi individualiai pasirinkti suderinamą donoro kraują;
b) nustatant standartinių eritrocitų „monetų juostelių“ susidarymą esant tiriamam serumui, nenormalų rezultatą patartina patvirtinti naudojant standartinius 0 (I) grupės eritrocitus. Norėdami atskirti "monetų juosteles" ir tikrus agliutinatus, įlašinkite 1-2 lašus izotoninio natrio chlorido tirpalo ir suplakite plokštelę, kol "monetų juostos" bus sunaikintos;
c) anti-A arba anti-B antikūnų nebuvimas. Galbūt naujagimiams ir pacientams, kurių humoralinio imuniteto slopinimas;

iš viso puslapių:

LITERATŪRA [Rodyti] .

Imunologinė donoro ir recipiento atranka kraujo perpylimui, jo komponentams ir kaulų čiulpų transplantacijai / Comp. Shabalin V.N., Serova L.D., Bushmarina T.D. ir kiti - Leningradas, 1979. - 29 p.
Kaleko SP, Serebryanaya NB, Ignatovich GP ir kt.. Allosensibilizacija hemokomponentinėje terapijoje ir histo-suderinamų donorų ir recipientų porų atrankos optimizavimas karo ligoninėse / Metodinė. rekomendacijos.- Sankt Peterburgas, 1994.- 16 p.
Praktinė transfuziologija / Red. Kozinets G.I., Biryukova L.S., Gorbunova N.A. ir kt. - Maskva: Triada-T, 1996. - 435 p.
Karinės transfuziologijos vadovas / Red. E. A. Nechajevas. - Maskva, 1991 .-- 280 p.
Transfuzijos medicinos vadovas / Red. E. P. Svedentsova. - Kirovas, 1999.- 716s.
Rumjantsevas A.G., Agranenko V.A.
Shevchenko Yu.L., Zhiburt E.B., Saugus kraujo perpylimas: vadovas gydytojams.- SPb .: Petras, 2000.- 320 p.
Shevchenko Yu.L., Zhiburt E.B., Serebryanaya N.B. Hemokomponentinės terapijos imunologinis ir infekcinis saugumas.- SPb .: Nauka, 1998.- 232 p.
Schiffmanas F.J. Kraujo patofiziologija / Per. iš anglų kalbos - M. - SPb .: Leidykla BINOM - Nevskio tarmė, 2000. - 448 p.
Kraujo perpylimas klinikinėje medicinoje / Red. P. L. Mollison, C. P. Engelfriet, M. Contreras. Oksfordas, 1988, 1233 p.

Šaltinis: Medicinos laboratorinė diagnostika, programos ir algoritmai. Red. prof. Karpishchenko A.I., Sankt Peterburgas, Intermedica, 2001 m

Kraujo grupių nustatymo pagal ABO sistemą procedūra susideda iš antigenų A ir B aptikimo eritrocituose naudojant standartinius antikūnus ir agliutininų naudojimą analizuojamo kraujo plazmoje arba serume su standartiniais eritrocitais. Ši technika buvo sukurta XX amžiaus pradžioje ir iki šiol aktyviai naudojama medicinoje. Antigenų A ir B nustatymas atliekamas naudojant anti-A ir anti-B tsoliclones.

Pagrindinės sąvokos

Donorams visada nustatomi ne tik antigenai eritrocituose, bet ir agliutininai serume (plazmoje), naudojant standartinius eritrocitus. Veninis kraujas naudojamas kaip biomedžiaga. Prieš tyrimą dieną prieš analizę būtina atsisakyti riebaus maisto ir nerūkyti pusvalandį prieš atliekant tyrimą. Kraujo grupės nustatomos du kartus: iš pradžių medicinos skyriuje, kur perkama medžiaga, o vėliau patvirtinama tyrimais laboratorijoje.

Kraujo grupių nustatymas pagal ABO sistemą yra pagrindinis kraujo perpylimo medicinoje naudojamas testas. Kai kurie gyvūnai taip pat turi panašią kraujo grupių sistemą, pavyzdžiui, šimpanzės, gorilos ir bonobos.

Atradimų istorija

Moksle yra visuotinai priimta nuomonė, kad kraujo grupių nustatymo metodą pagal ABO sistemą pirmasis nustatė austrų mokslininkas Karlas Landsteineris 1900 m. Tada jis savo darbe aprašė trijų tipų antigenus. Už tai po trisdešimties metų jis buvo apdovanotas Nobelio medicinos ir fiziologijos premija. Dėl to, kad anksčiau tarp mokslininkų nebuvo glaudžių ryšių, vėliau buvo nustatyta, kad čekų serologas Janas Jansky, nepriklausomai nuo K. Landsteinerio tyrimų, pirmiausia aprašė keturias žmogaus kraujo grupes, tačiau jo tyrimai nebuvo žinomi plačiajai auditorijai. Šiuo metu Rusijoje ir buvusios SSRS respublikose naudojama būtent Y. Yansky sukurta klasifikacija. Jungtinėse Valstijose W.L.Mossas panašų veikalą parašė 1910 m.

Kraujo grupių nustatymo metodas pagal ABO sistemą naudojant tsoliklonus

Kraujo grupė turėtų būti nustatoma gerai apšviestoje patalpoje, stebint 15–25 laipsnių Celsijaus temperatūros diapazoną, nes nukrypimai nuo šios normos gali turėti įtakos tyrimo rezultatams. Ant plokštelės ar lėkštutės užrašomi paciento inicialai ir pavardė. Iš kairės į dešinę arba apskritimu taikomi standartiniai grupių pavadinimai (O (I), A (II), B (III)). Po jais lašas po lašo dedamas atitinkamas serumas su atskiromis pipetėmis kiekvienam tipui. Tada į juos pilamas paciento kraujas. Medžiaga tyrimams paimama iš ausies spenelio arba piršto. To reikalauja kraujo grupės nustatymo pagal ABO sistemą technika.

Taip pat legalu naudoti raudonuosius kraujo kūnelius mėgintuvėlyje susidarius krešuliui. Būtina, kad serumo kiekis būtų dešimt kartų didesnis už pridėto kraujo kiekį. Po to lašai sumaišomi su stiklinėmis lazdelėmis (kiekvienam atskirai). Per penkias minutes švelniai pakratydami plokštelę stebėkite, ar neatsiras hemagliutinacijos reakcija. Jis randamas tuo, kad atsiranda mažų raudonų gabalėlių, kurie vėliau susilieja į didesnius. Šiuo metu serumas beveik visiškai praranda savo spalvą.

Norint pašalinti klaidingą hemagliutinaciją paprastu eritrocitų klijavimu, po trijų minučių reikia įlašinti vieną lašą fiziologinio tirpalo ir patikrinti, ar agliutinacija išlieka. Jei taip, vadinasi, tai tiesa. Štai ir viskas, kraujo grupių apibrėžimas pagal ABO sistemą jau baigtas.

Rezultatų interpretacija

Dėl to galima pastebėti keturias reakcijas:

su jokiu serumu nevyksta agliutinacija – pirmoji grupė yra O (I);
reakcija pasireiškė su I (ab) ir III (a) serumu - antrąja grupe A (II);
agliutinacija vyksta su I (ab) ir II (b) serumais – trečiąja B grupe (III);
jei reakcija vyksta su trimis serumais, būtina atlikti papildomą procedūrą su AB (IV) grupės reagentais, kurie yra standartiniai; jei tokiame laše nėra agliutinacijos, galime manyti, kad tai yra 4-oji AB (IV) kraujo grupė.

Greitas Rh faktoriaus metodas

Kraujo grupių nustatymo metodas pagal ABO sistemą apima tuo pačiu metu Rh faktoriaus (Rh) nustatymą.

Plokštelės paviršius iš anksto sudrėkintas ir ant jo užrašomas „kontrolinis serumas“ ir „antireus serumas“. Tada po užrašais lašinamas vienas ar du lašai reikalingų reagentų ir į juos įlašinama analizuojama medžiaga. Tam taip pat galite naudoti kraują iš piršto (tokį kiekį, kiek serumo tūris) arba eritrocitus, likusius mėgintuvėlio apačioje po krešulio atsiradimo (pusė serumo tūrio). Medžiagos pasirinkimas neturi įtakos galutiniam rezultatui. Tada kraujas ir serumas sumaišomi su sausa stikline lazdele, po to reakcija laukiama penkias minutes. Kad būtų pašalinti klaidingi rodmenys, po 3–4 minučių įpilama izotoninio natrio chlorido tirpalo (tik keli lašai). Kraujo grupės nustatymas pagal ABO ir Rh sistemas atliekamas labai dažnai.

Jei serume sumažėja eritrocitų agliutinacija, tai rodo teigiamą Rh kraują. Remiantis statistika, Rh + randama 85% pasaulio gyventojų. Jo nebuvimas leidžia kalbėti apie Rh neigiamą priklausomybę. Jei kontroliniame serume atsiranda agliutinacija, vadinasi, jis tapo netinkamas naudoti. Deja, ABO kraujo grupės nustatymo algoritmas ne visada veikia puikiai.

Kokių klaidų galima padaryti naudojant šią techniką?

Netikslumai nustatant kraujo priklausomybę tam tikrai grupei priklauso nuo šių priežasčių:

Techninė.
Tiriamo kraujo biologinis specifiškumas.
Standartinių serumų ir eritrocitų trūkumas.

Techninės klaidos

Galimos klaidos kryžminiu būdu nustatant ABO sistemos kraujo grupę:

Biologinės specifinės klaidos

Klaidos, susijusios su analizuojamo kraujo biologiniu specifiškumu, skirstomos į dvi rūšis.

Priklauso nuo eritrocitų savybių.
Klaidos dėl serumo biologinių savybių.

Apsvarstykite kiekvieną tipą išsamiau.

Priklausomai nuo eritrocitų savybių

Vėlyvoji agliutinacija dėl „silpnų“ eritrocitų ir antigenų formų. Norint išvengti klaidų, donorų ir recipientų kraujo grupę būtina nustatyti naudojant standartinius eritrocitus. Agliutinogenas A 2 turėtų būti identifikuojamas pakartotinai bandant su kitų tipų reagentais ir kitais stikliniais indais, padidinant reakcijos registravimo laiką.
"Panagliutinacija" ("autoagliutinacija") - kraujo gebėjimas parodyti tą pačią nespecifinio pobūdžio reakciją su visais serumais, įskaitant savo. Po penkių minučių tokios agliutinacijos sunkumas susilpnėja, nors turėtų padidėti. Panašūs atvejai stebimi pacientams, sergantiems vėžiu, nudegusiais ir kt. Kaip kontrolę, būtina įvertinti analizuojamų eritrocitų agliutinacijos pasireiškimą ketvirtos grupės standartiniame serume ir fiziologiniame tirpale. Kai "panagliutinacija" kraujo grupė nustatoma trigubai eritrocitų plovimui. Jei tai neduoda norimo rezultato, verta pakartotinai ištraukti kraujo mėginį į prieš procedūrą pašildytą mėgintuvėlį ir mėginį įdėti į termokonteinerį, kuris padės palaikyti 37 laipsnių Celsijaus ir aukštesnę temperatūrą. Tada jį reikia nunešti į laboratoriją, kurioje palaikoma aukščiau nurodyta temperatūra ir naudojamas pašildytas druskos tirpalas, plokštelė ir reagentai.

Kartais analizuojamo kraujo eritrocitai išsidėsto kaip „monetų stulpeliai“ ir gali būti supainioti su agliutinatais. Jei įlašinsite du lašus izotoninio tirpalo ir švelniai suplakite tabletę, raudonieji kraujo kūneliai bus tinkamoje padėtyje.
Nepilna arba mišri agliutinacija, pasireiškianti antros, trečios ir ketvirtos grupės pacientams dėl kaulų čiulpų transplantacijos arba per pirmuosius tris mėnesius po kraujo perpylimo 0 (I).

Biologinis serumas

Klaidos, susijusios su sugedusių standartinių eritrocitų ir serumų naudojimu

Silpni serumai, kurių galiojimo laikas baigiasi arba kurių titras mažesnis nei 1:32, gali sukelti silpną ir vėlyvą agliutinaciją. Tokių reagentų naudojimas yra nepriimtinas.

Naudojant netinkamus standartinius eritrocitus arba serumus, paruoštus nesteriliomis sąlygomis ir nepakankamai konservuotus, atsiranda nespecifinio pobūdžio „bakterinė“ agliutinacija.

Yra daug populiarių prielaidų apie ABO sistemos kraujo grupes, kurios atsirado iškart po jos atradimo įvairiose pasaulio kultūrose. Taigi, pavyzdžiui, praėjusio amžiaus 30-aisiais Japonijoje ir kai kuriose kitose šalyse išpopuliarėjo teorija, jungianti kraujo grupę su tam tikro tipo asmenybėmis. Panašios teorijos populiarios ir šiandien.

Taip pat yra nuomonė, kad A grupę turintis žmogus yra jautrus stiprioms pagirioms, O – gerais dantimis, o A2 grupei – aukščiausias IQ lygis. Tačiau tokie teiginiai nebuvo moksliškai įrodyti.

Mes ištyrėme kraujo grupių nustatymą ABO sistema naudojant standartinius serumus.

Kraujo grupė pagal ABO sistemą nustatoma naudojant agliutinacijos reakciją. Yra trys būdai nustatyti kraujo grupes pagal ABO sistemą:

Standartinių izohemagliutinuojančių serumų pagalba;

Standartinių izohemagliutinuojančių serumų ir standartinių eritrocitų pagalba (kryžminis metodas);

Naudojant monokloninius antikūnus (anti-A ir anti-B tsoliclones).

Jei reikia skubiai nustatyti kraujo grupę (esant kraujavimui, būtinas skubus kraujo perpylimas), ligoninės gydytojas pats nustato kraujo grupę (laboratorijoje atlieka pakartotinį patikrinimą, bet po to) .

1. Kraujo grupių nustatymas naudojant standartinius izohemagliutinuojančius serumus

Metodo esmė – A ir B grupės antigenų nustatymas tiriamame kraujyje naudojant standartinius izohemagliutinuojančius serumus. Tam naudojama agliutinacijos reakcija. Reakcija nustatoma gerai apšviestoje patalpoje 15-25C temperatūroje.

Reakcijos metodas

3. Išmaišę lėkštę periodiškai pakratykite.

Agliutinacija prasideda per pirmąsias 10-30 s, stebėjimas turėtų būti atliekamas iki 5 minučių, nes vėliau gali atsirasti agliutinacija, pavyzdžiui, su A2 grupės eritrocitais (2).

4. Į tuos lašus, kuriuose įvyko agliutinacija, įlašinkite vieną lašą izotoninio natrio chlorido tirpalo, po kurio įvertinamas reakcijos rezultatas.

Rezultatų interpretacija

Agliutinacijos testas gali būti teigiamas arba neigiamas. Esant teigiamai reakcijai, dažniausiai per pirmąsias 10-30 sekundžių, mišinyje atsiranda maži raudoni grūdeliai (agliutinatai), susidedantys iš sulipusių eritrocitų, matomų plika akimi. Maži grūdeliai pamažu susilieja į didesnius grūdelius, o kartais ir į netaisyklingus dribsnius. Tokiu atveju serumo spalva iš dalies arba visiškai pakinta. Teigiama reakcija gali būti smėlio ar žiedlapių.

Rh faktoriaus nustatymas Rh faktoriaus antigeninė sistema

1940 metais K. Landsteineris ir A. Wieneris žmogaus eritrocituose atrado visiškai naują antigeną, kurį pavadino Rh faktoriumi (Rh). Rh faktoriaus yra 85% žmonių kraujyje, o 15% jo nėra.

Rezus antigenų sistemai atstovauja penki pagrindiniai antigenai: D, C, c, E, e (anksčiau buvo manoma, kad jų yra šeši, vėliau buvo įrodyta, kad alelinio geno d nėra). C ir c, taip pat E ir e – aleliniai antigenai. Kiekviena chromosoma turi tik tris genus iš penkių: D, C arba c, E arba e.

Aktyviausias iš visų Rh0 (D) antigenų yra Rh faktorius. Priklausomai nuo jo buvimo ar nebuvimo, žmogaus kraujas skirstomas į Rh teigiamą (Rh +) ir Rh neigiamą (Rh-).

Rh faktoriaus nustatymo metodai

Visi Rh faktoriaus nustatymo metodai skirstomi į klinikinėje praktikoje naudojamus ir laboratorinius metodus.

Rho (D) nustatymo metodai klinikinėje praktikoje

Reakcijos metodas. Tyrimas atliekamas centrifuginiuose mėgintuvėliuose, kurių tūris ne mažesnis kaip 10 ml. Į mėgintuvėlio dugną įlašinamas vienas lašas standartinio universalaus reagento, kuris yra AB (IV) grupės antirezus serumas, praskiestas 33 % dekstrano tirpalu, po to lašinamas vienas lašas tiriamojo kraujo (arba eritrocitų). pridėta prie jo. Sukamuoju mėgintuvėlio pasukimu turinys ištepamas ant jo vidinio paviršiaus taip, kad turinys pasiskirstytų išilgai sienelių. Tai žymiai pagreitina agliutinaciją ir daro ją stambia. Agliutinacija ant mėgintuvėlio sienelių įvyksta per pirmąją minutę, tačiau, kad susidarytų stabilus antigeno-antikūno kompleksas ir agliutinacija būtų aiški, stebėkite mažiausiai 3 minutes. Tada, kad būtų išvengta nespecifinės eritrocitų agregacijos, į mėgintuvėlį įpilkite 2-3 ml fiziologinio tirpalo ir išmaišykite mėgintuvėlį du kartus apversdami (nekratydami!).

Rezultatų interpretacija.

Agliutinacijos buvimas (dideli dribsniai skaidraus skysčio fone) rodo, kad tiriamas kraujas priklauso Rh.

Ottenbergo taisyklė

agliutinuojasi tik perpilto donoro kraujo eritrocitai, nes suleisto kraujo agliutininai atskiedžiami paciento kraujagyslių dugne, jų titras tampa žemas ir jie nepajėgia agliutinuoti recipiento eritrocitų. Pagal Ottenbergo taisyklę galima perpilti kraują, kurio eritrocitų negali agliutinuoti recipiento serumas.

Ottenbergo taisyklė galioja tik perpylus iki 0,5 litro paaukoto kraujo (!).